首先借助SDS-PAGE凝胶，将总蛋白按照不同分子量大小进行分离，然后将胶上的蛋白质转移到膜上，再利用相应的靶标抗体进行检测的方法。

一、Western Blot 实验流程总览

1. 制胶（PAGE凝胶快速制备试剂盒）
   a. 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.7mL，混匀；
   b. 向上述步骤a的混合溶液中加入60μL的改良型促凝剂，混匀；
   c. 将步骤b的混合溶液注入制胶玻璃板中，
   d. 待下层胶凝固后（约15min），倒去上层苯乙醇；
   e. 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.75mL，混匀；
   f. 将步骤e的混合溶液中加入15μL的改良型促凝剂，混匀；
   g. 步骤f的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳子；
   h. 待上层胶凝固后，拔去梳子即可用于电泳。
   分离胶（下层胶）80v，30min
   浓缩胶（上层胶）120v，1h

   
   
   
   
   制胶配方.png
   
   

2. 蛋白电泳
   a、组装SDS-PAGE
   b、蛋白上样
   c、接通电源、开始电泳

   
   
   
   
   上样与电泳.png
   
   
   
   
   
   跑电泳.jpg
   
   

3. 转膜

4. 封闭、孵一抗二抗

5. 显影