动物细胞融合也称细胞杂交(cell hybridization),是指两个或多个动物细胞 融合成一个细胞的过程。
方法和步骤
(1)在15ml离心管加Alsever液8ml,用注射器从鸡翼下静脉取血2ml,注入离心管,混匀后置 4℃冰箱中备用(可保存1周)。
(2)实验时取此贮存鸡血1ml加入0.85%生理盐水4ml,充分混均,1000rpm离心5分钟。
(3)弃上清液,加入0.85%生理盐水4ml,充分混匀,1000rpm离心5分钟,弃上清。再重复此步骤1次。
(4)在沉淀中加入1ml GKN溶液,混匀使之成为单细胞悬液。
(5)取1ml细胞悬液转移到新离心管中,缓慢加入50%PEG溶液0.5ml,边加边摇匀。然后 置于37℃水浴中,静置5~20分钟。
(6)20分钟后,加入GKN溶液至8ml,静置于水浴中20分钟左右。
(7)1000rpm 离心3分钟,弃去上清,加GKN溶液再离心1次。
(8)弃去上清,加入GKN溶液少许,混匀,取少量悬浮于载玻片上,加入詹姆斯绿染液 (Janus green solution),用牙签混匀,3分钟后,盖上盖玻片,观察细胞融合情况。
(9)计算融合率:融合率=视野内发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数×100%。
实验结果在显微镜下可看到单核细胞、双核细胞和多核细胞,单核细胞是未发生融合
的红细胞,双核细胞是两个细胞发生了融合,多核细胞则是多个细胞融合的结果。